Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出新现肝细胞自身抗棒状到经常出新现1改型白血病药理学疼痛的令人满意领军在孩童时代就有很好的阐述，多个肝细胞自身抗棒状乙型肝炎的孩童里有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的孩童这一数量增高到84%。相对于之下，占多数药理学1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的患病机制还没取得应有的研究。

愈发多的人开始运用于分期系统来假定1改型白血病的令人满意：生殖在经常出新现多种肝细胞自身抗棒状时踏入第1下一阶段，经常出新现血糖异常时踏入第2下一阶段，经常出新现疼痛时踏入第3下一阶段。一些多发肝细胞自身抗棒状乙型肝炎的生殖，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为患病的1改型白血病。我们之前阐述了一小组在首次扫描到多种肝细胞自身抗棒状采样后非常不及10年无白血病的极慢令人满意者，这小组疼痛人数不及，但外观上非常明确。随后，我们发现肝细胞免疫特异性CD8+T蛋白质反应在令人满意较慢的疼痛里也就是说不普遍存在，但在最近患病和则有的白血病疼痛里很容易扫描到。这或许说明了，与令人满意疼痛相对于，这些疼痛自身突变的抑制提升。

早期研究说明了，尽管抑制性T蛋白质(Treg)数量经常性，但白血病疼痛普遍存在一些系统缺陷，其里包括对IL-2的反应能力降低。此外，白血病疼痛里的波动CD4+T蛋白质或许对抑制更具抵抗性，乏善可陈为波动T蛋白质的抑止逼近，自然激发的Treg和游离激发的其会Treg，以及免疫经历的CD4+T蛋白质里IL-2反应逼近。本研究的目的是阐述了CD4+抑制性T蛋白质(Treg)在群集极较慢令人满意者里的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁一般而言住院的疼痛亲人里安全检查1改型白血病的险恶因素所。我们之前阐述了长期较慢令人满意者的外观上，他们保持多重肝细胞自身抗棒状乙型肝炎超过10年，但没经常出新现白血病的药理学疼痛，慢性或非性虐待免疫。随后，10名之后保持无白血病并愿意提供大量血液采样的较慢令人满意者纳入T和B蛋白质系统分析新方法。在在此之前的研究里，8名慢令人满意者(SP小组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身抗棒状乙型肝炎。所有的举例来说都处于1改型白血病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗棒状对某些免疫的乙型肝炎反应，然而，一名疼痛早已处于2期非常不及6年，但没经常出新现药理学疼痛，一名疼痛被诊断为白血病，该受试者72岁，在通过掩蔽试验中采样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在分析新方法里对该NADP透过了实质上评估。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，选用多参数流式蛋白质拳法和T蛋白质抑止次测试评估NADP里Treg的频谱、表改型和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)透过无行政官员聚类分析新方法，评估Treg表改型。

结果：与健康NADP相对于，来自慢令人满意棒状的梦境CD4+T蛋白质的行政官员聚类说明了，抑制的梦境CD4+ Treg频谱增高，与糖皮质激素其会的TNFR具棒状蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c消退的疼痛与令人满意较慢者和匹配的准确领军相对于，Treg可知各有不同。系统分析新方法说明了，与健康NADP相对于，来自较慢令人满意棒状的Treg抑制的CD4+波动T蛋白质抑止显着受损。乏善可陈为对波动CD4+T蛋白质CD25和CD134解读的抑止增高。

示意图1 深入的表改型分析新方法说明了，CD4+Treg亚改型在慢令人满意队列里增高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标示物解读鉴定出新10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个坦克部队(100个坦克部队)，非常大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由表小组周围上色。每个路由表里的年糕示意图问到单个标示的解读级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了整棒状标示解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成示意图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于较数量级为每个metacluster箱本站示意图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。蓝色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的分析新方法证实，Treg频谱的增高是令人满意较慢的标志。评定门控(a - f)和大豆分析新方法(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T蛋白质上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(星点)小组以及NADPSP 606(蓝色)里CD25+ cd127的频谱综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)大豆簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度上色，箭头厚实新的簇被鉴别为SP和HD队列之间的不同。(j)箱本站示意图说明了了在SP(星点)和HD(灰点)小组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于较数量级(数量)。(k)直方示意图说明了每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示相对于较解读与背景解读(红色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。背景与所有其他簇里标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

示意图3 与健康献血者相对于，令人满意较慢者梦境treg的GITR增高。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，说明了直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有NADP包括，p< 0.05(红色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)串联，说明了直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

示意图4 来自较慢令人满意的CD4+ treg蛋白质控制波动CD4+T蛋白质的能力降低。SP小组用红色的本站和左上方问到，HD小组用红色的本站和左上方问到，蓝色的本站/左上方问到NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(应答者)被标示为CFSE, Treg按掩蔽的数量校准。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，培育出新3同月透过流式蛋白质拳法扫描。(a-d)与CD4+应答者相对于较应的treg培育出新(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育出新。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。运用于乙型肝炎对照(抑制的响应蛋白质分别为treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析新方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 波动CD4+T蛋白质对较慢令人满意的T蛋白质转化的抑止更敏感。SP小组用红色的本站和左上方问到，HD小组用红色的本站和左上方问到，蓝色的本站/左上方问到NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示，treg按掩蔽的数量校准。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，培育出新3同月透过流式蛋白质拳法(CD25反染)和蛋白质因子分析新方法。HD Treg与HD、SP或sp606应答者联合培育出新。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE抑止百分领军(b)。(c,d) CD25抑止百分领军(c)和CD134抑止百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出新里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析新方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们论断的论断是，来自较慢令人满意子的转化梦境CD4+Treg在GITR解读里取得了拓展和多样，忽略了进一步研究Treg在1改型白血病安全性生殖里的异质性的更进一步。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28