Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次经常出现胰岛自身免疫球蛋白到经常出现1改进型癌症外科病征的成果率在幼儿时期就有很好的揭示，多个胰岛自身免疫球蛋白无病征的幼儿之中有70%在胰岛素转成后10年内患上癌症，而随访15年的幼儿这一%减小到84%。比起来说之下，占外科1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的复发的的系统还并未得到充份的研究成果。

越来越多的人开始运用于分期的系统来定义1改进型癌症的成果：形态在经常出现多种胰岛自身免疫球蛋白时进入第1下一阶段，经常出现浓度异常时进入第2下一阶段，经常出现病征时进入第3下一阶段。一些多发胰岛自身免疫球蛋白无病征的形态，在1期和2期，成果较快，并转变为复发的1改进型癌症。我们此前揭示了一小组在首次监测到多种胰岛自身免疫球蛋白样本后至极少10年无癌症的极快成果者，这小组病患者人数极少，但特点非常说明。随后，我们发现胰岛自身特异性特异性CD8+T蛋白质自由基在成果减快的病患者之中基本不发挥作用，但在近期复发和长期发挥作用的癌症病患者之中很容易监测到。这意味著表明，与成果病患者比起来说，这些病患者自身免疫自由基的调节增强。

20世纪研究成果表明，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但癌症病患者发挥作用一些基本功能缺陷，其之中仅限于对IL-2的自由基技能增大。此外，癌症病患者之中的现像CD4+T蛋白质意味著对调节非常具抵抗性，展现出为现像T蛋白质的抑止减慢，自然诱发的Treg和体外诱发的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T蛋白质之中IL-2自由基减慢。本研究成果的最终目标是揭示了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群极减快成果者之中的特点，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

原理：BOX研究成果是一项以青年人依此的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病患者直系亲属之中监测1改进型癌症的脆弱因素。我们此前揭示了长期减快成果者的特点，他们保持多重胰岛自身免疫球蛋白无病征超过10年，但并未经常出现癌症的外科病征，快性或非开展性自身免疫。随后，10名之前保持无癌症并愿意包括大量血液样本的减快成果者纳入T和B蛋白质基本功能深入研究。在目前的研究成果之中，8名快成果者(SP小组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰岛自身免疫球蛋白无病征。所有的小组织者都正处于1改进型癌症成果的1期，尽管一些人随后失掉了胰岛自身免疫球蛋白对某些特异性的无病征自由基，然而，一名病患者从未正处于2期至极少6年，但并未经常出现外科病征，一名病患者被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究之中对该NAD开展了实质上评估。分离出来外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质心法和T蛋白质抑止试验评估NAD之中Treg的频带、表改进型和基本功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重回)开展无督导聚类深入研究，评估Treg表改进型。

结果：与肥胖症NAD比起来说，来自快成果体的思绪CD4+T蛋白质的督导聚类看出，抑制的思绪CD4+ Treg频带减小，与糖皮质激素诱发的TNFR涉及蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c增高的病患者与成果减快者和冗余的对照小组比起来说，Treg谱有所多种不同。基本功能深入研究表明，与肥胖症NAD比起来说，来自减快成果体的Treg介导的CD4+现像T蛋白质抑止显著损坏。展现出为对现像CD4+T蛋白质CD25和CD134传达的抑止减小。

三幅1 深入的表改进型深入研究看出，CD4+Treg亚改进型在快成果数据流之中减小。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据记号物传达鉴定出10个元簇:思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)运用于9个多种不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个端口代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，相当大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口小组周围上色。每个端口之中的饼三幅回不宜单个记号的传达档次。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整体记号传达。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)分解成三幅，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖物。(e-l)比起金属量为每个metacluster罐终点站三幅(金属量> 0.05%)具体为HD和SP小组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白质(l)。白色白点代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的预测模改进型表明，Treg频带的减小是成果减快的标志。评定门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP小组织者和冗余的HD小组织者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的别具特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分离出来，模拟FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及NADSP 606(白色)之中CD25+ cd127的频带汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度制做，对角突出的簇被辨识为SP和HD数据流之间的多种不同。(j)罐终点站三幅看出了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起金属量(%)。(k)直方三幅看出每个簇的表改进型(黑色)和Treg记号比起传达与时代背景传达(白色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。时代背景与所有其他簇之中记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者比起来说，成果减快者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T蛋白质元簇(思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达记号的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的传达热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR传达串联，看出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(白色)所有NAD仅限于，p< 0.05(白色)NADSP 606和冗余的HD不仅限于在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)串联，看出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自减快成果的CD4+ treg蛋白质掌控现像CD4+T蛋白质的技能增大。SP小组用白色的终点站和白点回不宜，HD小组用黑色的终点站和白点回不宜，白色的终点站/白点回不宜NADsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按推论的%滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，养成3几天后开展流式蛋白质心法监测。(a-d)与CD4+；也者比起不宜的treg养成(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。运用于无病征对照(抑制的响不宜蛋白质分别为treg)计算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 现像CD4+T蛋白质对减快成果的T蛋白质转化的抑止非常敏感。SP小组用白色的终点站和白点回不宜，HD小组用黑色的终点站和白点回不宜，白色的终点站/白点回不宜NADsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按推论的%滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，养成3几天后开展流式蛋白质心法(CD25反染)和蛋白质因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们算出的论点是，来自减快成果子的转化思绪CD4+Treg在GITR传达之中得到了扩展和充沛，务实了进一步研究成果Treg在1改进型癌症风险形态之中的异质性的前提。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28